Revista de Proteómica y Bioinformática
Acceso abierto

abstracto

Alteraciones inducidas por Epac en el proteoma de células de neuroblastoma humano SH-SY5Y

Incluso Birkeland, Gyrid Nygaard, Eystein Oveland, Olav Mjaavatten, Marie Ljones, Stein Ove Doskeland, Camilla Krakstad y Frode Selheim

Hasta ahora, el proteoma de la línea celular de neuroblastoma humano SH-SY5Y consta de 1029 proteínas únicas. Mediante el uso de fraccionamiento subcelular, SDS PAGE y nanoLC-Q-TOF-MS/MS, ampliamos el proteoma en un 72,2 % adicional, lo que resultó en 3707 proteínas únicas.

Se sabe que el estadio de diferenciación de las células tumorales del neuroblastoma influye en el desenlace del paciente, y un estadio de diferenciación alto se correlaciona con un pronóstico favorable. Para dilucidar los efectos del AMPc en la diferenciación del neuroblastoma SH-SY5Y, utilizamos análogos de AMPc selectivos para activar Epac y PKA.

Descubrimos que la activación de Epac inducía la polimerización de actina y tubulina y el crecimiento de neuritas, mientras que la activación de PKA no lo hacía. Los efectos de la estimulación de Epac fueron abolidos por la eliminación de Epac1 con ShRNA.

Se utilizó el marcado de isótopos estables con aminoácidos en cultivo celular (SILAC) y la espectrometría de masas para revelar los efectos a largo plazo de la activación de Epac en el proteoma SH-SY5Y. Encontramos 101 proteínas expresadas reguladas al alza y 74 reguladas a la baja. Las proteínas reguladas al alza se asociaron en general con la diferenciación y adhesión de las células neuronales, mientras que las proteínas reguladas a la baja típicamente estaban involucradas en el procesamiento del ARN. Concluimos que la diferenciación neuronal bioquímica y morfológica inducida por AMPc de las células SH-SY5Y de neuroblastoma humano está mediada por Epac.