Avances en Ingeniería Genética
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abstracto

Ingeniería de una lipasa hacia la termoestabilidad: estudios sobre el efecto aditivo de las dos mutaciones termoestabilizadoras en la superficie de la proteína

Rakesh K, Nisha C, Ranvir S, Pushpender KS, Jagdeep K*

En este estudio, hemos demostrado el efecto combinado de dos mutaciones puntuales únicas S311C (LipR2) y R214C (LipR3) en la estabilidad de la proteína y el cambio general en las propiedades bioquímicas. Descubrimos que ambas mutaciones están cerca de la superficie y mejoraron individualmente la estabilidad térmica de la proteína (T1/2 para S311C = 4,5 h y R214C = 7 h a 60 ° C). Pero, su efecto combinado no fue aditivo sobre la termoestabilidad. T1/2 del doble mutante (LipR2 + LipR3) fue de 4 h a 60 °C. Los estudios de dicroísmo circular (CD) y fluorescencia también respaldaron nuestros hallazgos. Los estudios de modelado de homología demostraron que en la doble mutante (LipR4) la cadena lateral de Cys311 sobresale hacia el solvente a granel y está fácilmente disponible para la oxidación del grupo sulfahydril. Esta podría ser la razón de su baja termoestabilidad en comparación con LipR3. También observamos que las cadenas laterales de Cys 214 no cambiaron. Aquí, una de las cisteínas (Cys311) se comporta como un residuo hidrofílico mientras que la otra (Cys 214) se comporta como un residuo hidrofóbico.

Palabras clave:

Lipasa; termoestabilidad; mutaciones; Enzima; Secuencia de nucleótidos

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