Ingeniería enzimática
Acceso abierto

abstracto

Descubrimiento de mutaciones genéticas por la enzima: chips para un método de escisión de desajuste enzimático simple y altamente delicado

Voskarides K

La seguridad de variedades oscuras de ADN es uno de los asuntos importantes en numerosos campos de la ciencia atómica. La secuenciación de Sanger se ha utilizado en la práctica diaria por este motivo. Sea como fuere, cuando necesita mirar un gran número de ADN estimado o abundantes ejemplos, esta estrategia es problemática, costosa y tediosa. Últimamente, la secuenciación futura (NGS) se ha utilizado en diferentes motivaciones detrás de la detección de cambios. Esta gran innovación de secuenciación es adecuada para una evaluación del tamaño del genoma, así como para evaluar la lista de características que causan conjuntos comparativos, como el desarrollo de diabetes juvenil (MODY). Si se ensamblan suficientes ejemplos sin demora, NGS es un sistema divertido y atractivo, ya que la agrupación de pruebas reduce el costo de ejecución por prueba. Sin embargo, si se espera que inspeccione 10~50 kb de grupos de ADN en un solo ensayo, necesita una estrategia de detección productiva y útil. Generalmente, el polimorfismo de adaptación monocatenario (SSCP) y la investigación heterodúplex (HA) fueron las técnicas más utilizadas por este motivo. Sin embargo, la afectabilidad de estas técnicas no fue aceptable para el ensayo completo. Aunque se ha entregado un número significativo de las estrategias de detección de transformación basadas en PCR modificadas, ninguna de ellas se hizo conocida debido a la baja afectación o carga potencial. Se crearon dos estrategias modificadas para HA, electroforesis en gel de ángulo desnaturalizante (DGGE) y electroforesis en gel de ángulo de temperatura (TGGE), para mejorar el aplazamiento de la reubicación del ADN heterodúplex en el gel cambiando la parte del gel o la temperatura. Si bien es posible que estas estrategias tengan una posición preferida sobre HA, requieren un equipo excepcional para correr o hacer el gel. De esta forma, estas técnicas ajustadas no han llegado a ser tan famosas como las primeras HA. La cromatografía de fluidos de élite desnaturalizante (DHPLC) es una especie de prueba de movimiento de portabilidad que no incluye electroforesis, sino que distingue cambios que dependen de la disminución de la temporada de mantenimiento del heterodúplex en una sección de HPLC. Si bien esta nueva innovación logra una alta afectabilidad, se necesita una tediosa mejora de las condiciones de reconocimiento de cambios para cada grupo de ADN para adquirir la mayor afectabilidad. Una técnica de detección de transformación ideal requeriría, por así decirlo, hardware y reactivos tradicionales; se puede aplicar una sola convención a cualquier grupo de ADN y tipos de cambio; y lograría una alta afectación, un alto rendimiento y una ejecución de gastos significativa. Es posible que la escisión de bungle compuesta (EMC) satisfaga estos estándares.