Revista de cromatografía y técnicas de separación
Acceso abierto

abstracto

Desarrollo de cromatografía líquida hidrófila zwitteriónica (ZICⓇHILIC-MS) Método de metabolómica para análisis de escopeta de orina humana

Drupad K Trivedi, Huw Jones, Ajit Shah y Ray K Iles

Orina es un producto del metabolismo del cuerpo y la mayoría de los productos metabólicos que salen a través del sistema renal se vuelven polares para ser solubles en agua. La resolución de metabolitos urinarios para estudios metabolómicos requiere el desarrollo de técnicas de separación HPLC que coincidan con esta característica de la química biológica. ZIC: HILIC es un candidato ideal para llevar adelante la resolución de dichos metabolitos donde la fase inversa no puede brindar una separación adecuada. Los datos metabolómicos deben procesarse mediante el análisis multivariado de Shotgun para seleccionar miles de analitos y sus variables, como la intensidad de los iones. En el desarrollo de la separación ZIC-HILIC con detección espectrométrica de masas (IT-ToF), se debe minimizar la variabilidad metodológica para que cualquier análisis de datos de escopeta no revele analitos biomarcadores potenciales que sean artefactos o se vean afectados negativamente por la técnica de separación y detección. Aquí, informamos el desarrollo de un método de espectrometría de masas ZIC-HILIC que es adecuado para el análisis de datos de orina SIMCA P+. Variables como la resolución, la reproducibilidad de la ejecución y la temperatura de almacenamiento de la muestra se evaluaron junto con el análisis de datos SIMCA P+ y el preprocesamiento del control de calidad. El método desarrollado combina ejecuciones de control de calidad que preprocesan y excluyen analitos que no son lo suficientemente robustos para futuros estudios de biomarcadores candidatos. Esto significó que se excluyeron los analitos lábiles que no se pudieron reproducir en el 70 % de las ejecuciones de control de calidad (que son conjuntos de todas las muestras procesadas ese día). Sin embargo, las muestras de orina almacenadas a 4 °C durante más de 9 meses contendrán metabolitos que se alterarán y producirán artefactos de marcadores de moléculas pequeñas en comparación con las muestras almacenadas a -20 °C. En conclusión, el método desarrollado es un método sólido de análisis de escopeta de espectrometría de masas ZIC-HILIC adecuado para el descubrimiento de biomarcadores sólidos en el metaboloma urinario.