Revista de Ciencias Agrícolas e Investigación Alimentaria
Acceso abierto

abstracto

Desarrollo de inmunoensayos Rapidot para la detección del virus de la punta del racimo del banano

Namratha ND, Narayan BM, Chougal A y Chidanand AR

BBTV se utilizó como antígeno para producir un anticuerpo variable de fragmento de cadena única (scFv) mediante la tecnología de visualización de fagos. Se seleccionaron dos clones que mostraban la lectura más alta en ELISA monoclonal, a saber, pBSNMAB5 y pBSNMAB40. Se subclonaron fragmentos de anticuerpo monocatenario de pBSNMAB5 y pBSNMAB40 en el vector de expresión corporal pQUANTa que permitió fusionarse transcripcionalmente con el fragmento de anticuerpo monoclonal scFv y el gen que codifica la enzima fosfatasa alcalina (PhoA). Los clones se secuenciaron con el cebador LMB3 directo y el cebador inverso pHEN y se caracterizaron. Los genes scFv de ambos clones tenían una longitud de 795 pb y se encontró que compartían una secuencia de homología similar. Los resultados de los análisis BLASTn y BLASTx indicaron un 85 % de homología con el gen del anticuerpo Fv de cadena sencilla anti-TNF alfa de construcción sintética, cds parciales y, además, el análisis BLASTx mostró que el 86 % de homología con la región variable de la cadena pesada del anticuerpo de las células B circulantes (Homo sapiens). Tras la expresión del clon, ha producido la proteína de fusión de ALP junto con el anticuerpo monoclonal pBSNMAB5 y pBSNMAB40. El conjugado scFv-ALP se ha producido contra la proteína BBTV. Utilizando este conjugado de anticuerpos, se desarrolló un kit de detección. Este kit de inmunodiagnóstico Rapidot detecta la concentración de BBTV tan baja como 0,9 g/ml tanto en la membrana NC como en el casete de membrana y también se comparó con otras proteínas para evaluar la especificidad de los monoclones generados contra BBTV.