Revista de Proteómica y Bioinformática
Acceso abierto

abstracto

Desarrollo de marcaje de leucina deuterada con inmunoprecipitación para analizar el complejo proteico celular

Shufang Liang, Xuejiao Xu, Haojie Lu y Pengyuan Yang

El marcaje de leucina deuterada (Leu-d 3 ) es un tipo de marcaje de isótopos estables mediante aminoácidos en cultivo celular (SILAC), que ha sido ampliamente utilizado para comparar y cuantificar la expresión relativa de proteínas. Ampliamos una inmunoprecipitación integrada (IP) junto con el enfoque SILAC (SILAC-IP) para diferenciar los socios de unión específicos asociados con una proteína cebo en dos poblaciones de células. Mediante esta estrategia SILAC-IP, las proteínas de unión específica identificadas se cuantificaron mediante el seguimiento de pares de péptidos marcados y no marcados con Leu-d 3 de los espectros de masas, lo que podría diferenciar proteínas de unión específica de socios no específicos con alta confianza. Aplicamos el método SILAC-IP para diferenciar proteínas de unión específicas asociadas con 14-3-3â en la línea celular de carcinoma hepatocelular humano QGY7703 entre los de la línea celular de hígado QSG7701. Se identificó que las proteínas que incluyen HSP86, SKB1hs, GADPH y MEP50 se asocian con 14-3-3â en QGY7703 con un alto nivel de unión que en las células QSG7701.