Revista de cromatografía y técnicas de separación
Acceso abierto

abstracto

Desarrollo y validación del método de espectrometría de masas en tándem de cromatografía líquida de alta resolución (HPLC-MS/MS) para la determinación de tenofovir en pequeños volúmenes de plasma humano

Mulubwa M, Rheeders M, Du Plessis L, Grobler A y Viljoen M

Determinación de las concentraciones de tenofovir en plasma (TFV) en pequeños volúmenes de plasma y en un período de tiempo corto es más deseable en un entorno clínico. El método HPLC-MS/MS fue desarrollado y validado para la determinación de TFV. Se extrajeron volúmenes de muestra de plasma de 10 µl mediante precipitación de proteínas. La cimetidina, utilizada como patrón interno (ISTD) y el TFV se separaron en una columna de fase inversa C18 (Phenomenex Kinetex TM 30 mm × 2,1 mm, 2,6 µm) con una precolumna. La fase móvil del gradiente consistió en 10 mmol/L de acetato de amonio en agua y acetonitrilo/metanol (50:50, v/v). Los tiempos de retención de TFV e ISTD fueron de 0,27 y 0,90 minutos, respectivamente, con un tiempo de ejecución de 2 minutos. La transición del padre al ión producto de TFV (m/z 288,072 →176,038) e ISTD (m/z 253,13 →158,987) se controló en modo de ionización positiva. Las curvas de calibración fueron lineales (r2 promedio, 0,9958) en un rango de concentración de TFV de 12,5 a 600 ng/mL. La recuperación media fue del 96,9%. La precisión, inter e intraensayo de tres controles de calidad y el límite inferior de cuantificación (12,5 ng/mL) estuvieron dentro del límite aceptable de <15% de error estándar relativo. El TFV fue estable en las condiciones estudiadas y no se observó efecto de matriz ni arrastre significativo. Se desarrolló, validó e incorporó un método distinto, confiable y robusto para la determinación de TFV en un volumen pequeño (10 μL) de plasma humano para determinar los niveles de TFV en plasma. en 30 mujeres infectadas por el VIH en tratamiento antirretroviral.