Revista de cromatografía y técnicas de separación
Acceso abierto

abstracto

Desarrollo y Validación de un Método de Cuantificación de Cortisol Libre Urinario en Orina de 24 horas por Detección de Masa

Momal Alexe*, Dhesse Quentin, Goderniaux Nicolas, Colsoul Marie-Lise, Closset Mélanie

Introducción: La medición de la excreción urinaria de corticosteroides y sus metabolitos se utiliza para evaluar la función suprarrenal en el síndrome de Cushing o el cáncer suprarrenal. La cuantificación del cortisol libre urinario (CLU) se recomienda para el diagnóstico del síndrome de Cushing.

Objetivo: Desarrollar una técnica de ensayo fácil, reproducible y específica para cuantificar UFC mediante cromatografía líquida de alta resolución (UHPLC)

Métodos: Desarrollamos un método basado en un ensayo de cromatografía líquida de ultraalta resolución (UHPLC) acoplado a un único detector de masas cuadrupolo (QDa). Las muestras se extrajeron mediante extracción líquida asistida (SLE). Las orinas se trataron previamente con ácido fórmico al 1% y el estándar interno. El cortisol se eluyó con diclorometano. El disolvente se evaporó y las muestras se reconstituyeron con agua. Los compuestos se separaron en una columna HSS T3 con una elución de gradiente (agua, ácido fórmico al 0,1% y acetonitrilo). El volumen de inyección fue de 1 µl y la velocidad de flujo de 0,6 ml/min. Investigamos el método en cuanto a linealidad, precisión, recuperación, exactitud y límites de detección y cuantificación.

Resultados: El rango lineal de este método fue de 5 µg/l a 1000 µg/l con un coeficiente de determinación de 0,99. La precisión se evaluó mediante la desviación estándar relativa (DER) para el intraensayo y el interensayo y fue inferior al 9% para ambos. El método mostró una recuperación adecuada de cortisol (>91%). El límite de detección fue de 0,28 µg/L y el límite de cuantificación fue de 0,75 µg/L.

Conclusión: El método de detección UFC UHPLC-QDa con un paso SLE muestra un rendimiento adecuado. Es fácil, reproducible y adecuado para el uso rutinario en el laboratorio.