Virología y Micología
Acceso abierto

abstracto

Desarrollo y evaluación de un antígeno ligado a enzimas de captura Ensayo inmunoabsorbente (AC-ELISA) para el diagnóstico de la peste porcina africana

Afayoa M, Olaho-Mukani W, Okuni JB, Atuhaire DK, Ochwo S, Majid JK y Ojok L

La peste porcina africana (PPA) es una fiebre hemorrágica viral de los cerdos con un impacto devastador en la producción porcina y los ingresos familiares en África. La falta de una vacuna y un tratamiento para la peste porcina africana ha aumentado la dependencia de un diagnóstico preciso como base para el control y la posible erradicación de la enfermedad. Por lo tanto, el objetivo de este estudio fue desarrollar y evaluar un ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA) en sándwich interno utilizando anticuerpos producidos contra aislados del virus de la peste porcina africana (ASFv) de Uganda para el diagnóstico de la PPA. El ASFv se cultivó en macrófagos alveolares de cerdo, las células infectadas se recolectaron, se lisaron y el virus se precipitó utilizando polietilenglicol 6000. El virus se purificó en una columna Sepadex G-200 equilibrada con Tris-HCl 50 mM PH 7.2 que contenía NaCl 0,15 M y las proteínas virales se separaron. por SDS-PÁGINA. La proteína diana (vp73) se cuantificó y utilizó para inmunizar conejos para producir anticuerpos policlonales contra ella. La inmunoglobulina IgG purificada (anti ASF-vp73 de conejo) se usó para la captura de antígeno en ELISA tipo sándwich. Se utilizaron ochenta y ocho (88) muestras de suero de cerdo positivas conocidas y 176 negativas conocidas para evaluar el rendimiento del ensayo. La sensibilidad diagnóstica del ELISA fue del 82,95 % (95 % IC, 78-100 %), la especificidad diagnóstica fue del 96,59 % (95 % IC, 90-100 %). Los valores predictivos positivo y negativo fueron 92,4% y 91%, respectivamente. El coeficiente de variación entre muestras de los valores de densidad óptica sin procesar para muestras positivas conocidas en diferentes ciclos fue <10% (rango 1,1-7,8), mientras que el coeficiente de variación intramuestra osciló entre 0,6-5,5% entre ciclos. El ELISA de captura de antígeno desarrollado tiene una alta sensibilidad y especificidad de diagnóstico y, por lo tanto, es bueno para la detección de la infección activa por PPA. Sin embargo, el ensayo desarrollado debe validarse aún más utilizando un tamaño de muestra más grande en diferentes condiciones de laboratorio y muestras de suero referenciadas de diferentes países endémicos de PPA.