Revista de cromatografía y técnicas de separación
Acceso abierto

abstracto

Desarrollo de un método de matriz de diodos de cromatografía líquida de ultra alto rendimiento para cuantificar el voriconazol en plasma humano

Yousra elmazahy*, Ahmed Farag, Lobna Shalaby, Mohamed Nagy,

Se desarrolló y validó un método de matriz de diodos (DAD) de fase inversa (RP) rápido y selectivo para determinar Voriconazol en plasma humano. Gracias al alto rendimiento y la sensibilidad de la cromatografía cromatográfica de líquidos de ultra alto rendimiento (UHPLC), solo hubo 7,5 minutos de tiempo de ejecución y no se utilizaron tampones. Se añadieron 200 µl de suero y 200 µl de patrón interno de fluconazol. Después de la precipitación de proteína simple con 400 µl de metanol, se separaron 10 µl del sobrenadante transparente en Agilent Zorbax Eclipse Plus®. Columna C18 (50*2,1 mm, 1,8 µm). La temperatura de la columna se mantuvo a 40°C. El caudal fue de 0,4 ml/min usando un gradiente de elución de metanol y agua. El tiempo de retención de fluconazol y voriconazol fue de 4,2 y 6,2 min, respectivamente. La detección se realizó utilizando un detector de matriz de diodos ajustado a una longitud de onda de 261 nm. El método se optimizó y validó según la guía de la FDA para la industria, validación del método bioanalítico. Se realizó la idoneidad del sistema, en términos de placas teóricas, resolución, cola y precisión de inyección en términos de área y tiempo de retención, para garantizar la idoneidad y eficacia del sistema cromatográfico según las pautas de ICH. El método desarrollado proporcionó resultados sobresalientes de recuperación, exactitud, precisión, selectividad, estabilidad y reproducibilidad. La curva de calibración fue lineal en un rango de 0,2 a 12 µg/ml con un coeficiente de correlación de 0,9997c, cubriendo adecuadamente el rango terapéutico para una adecuada monitorización del fármaco. El límite de detección y cuantificación fue de 0,2 µg/ml y 0,5 µg/ml, respectivamente. Los CV de exactitud y precisión intradiarios fueron 91,2 %-120 % y 0,8 %-6,8 %, respectivamente, y los CV de exactitud y precisión interdiarios fueron 92,6 %-115 % y 2,5 % a 7,5 %, respectivamente. La recuperación absoluta fue del 100% ± 15% para Voriconazol.