Revista de ciencia y terapia celular
Acceso abierto

abstracto

Diseño y caracterización molecular de la construcción del transgén C-Kit durante la espermatogénesis en ratones

Swanand Koli, Arun P Sikarwar, Murali R Babu y Reddy KVR

En los testículos posnatales, las células madre espermatogoniales (SSC) tipo A indiferenciadas se diferencian en células espermatogoniales tipo B (SGC) en presencia de c -Kit, que se expresa en una forma específica de célula/etapa durante la espermatogénesis en mamíferos. c-Kit está sujeto a un estricto control transcripcional, ya que es esencial no solo para las células germinales sino también para el desarrollo de células madre hematopoyéticas y melanocitos. Aunque la expresión de c-Kit es un proceso regulado dinámicamente, la base molecular de su regulación transcripcional durante la espermatogénesis sigue sin identificarse. El objetivo del estudio es determinar si la introducción o no de la construcción del transgén que expresa c-Kit en SSC negativas para c-Kit aisladas de ratones mutantes Wv/Wv se diferenciará y colonizará en los testículos de los ratones receptores. Para ello, se diseñó una construcción transgénica pG1-Kit-ORF-GFP de 7,4 kb que contiene un casete de expresión de c-Kit-ORFGFP de 4,4 kb y su expresión in vitro se confirmó mediante análisis de inmunofluorescencia y citometría de flujo. Para comparar los resultados, también se diseñaron tres construcciones de control-GFP, que tenían 1,1 kb (sin promotor c-Kit ni ORF), 4,1 kb (sin promotor c-Kit) y 1,4 kb (sin c-kit-ORF) y introducido en SSC por electroporación (EP). Estas SSC se introdujeron en los testículos de ratones infértiles receptores tratados con busulfano a través de rete utilizando el enfoque de trasplante de células germinales (GCT). Se observó que las SSC que portaban el inserto del transgén c-Kit-ORF-GFP podían colonizarse y diferenciarse en otros linajes de células germinales en los túbulos seminíferos de los ratones receptores en comparación con los controles. En conclusión, los ratones mutantes testículos Wv/Wv tienen la población de SSC, en la que la función de señalización de c-Kit se ve afectada por primera vez. Informamos que la función de SSC en los ratones infértiles receptores podría reanudarse con la introducción de c-Kit. -inserto del transgén ORF-GFP. Por lo tanto, los presentes hallazgos pueden tener un impacto significativo en la comprensión de la fisiología reproductiva y el potencial para nuevas terapias futuras en pacientes con insuficiencia testicular.