VIH: Investigación actual
Acceso abierto
ISSN: 2572-0805
ISSN: 2572-0805
Kemi Adeyanju, Gregory A. Dekaban y Michael J. Rieder
Antecedentes: Un medicamento comúnmente utilizado por las personas infectadas por el VIH-1 es el antimicrobiano sulfametoxazol (SMX) , que se utiliza en el tratamiento y profilaxis de la neumonía por pneumocystis. Sin embargo, SMX es responsable de una incidencia muy alta de reacciones adversas a medicamentos (RAM) de hipersensibilidad en la población con VIH-1. Si bien se desconoce la fisiopatología de las RAM en general, las RAM mediadas por sulfametoxazol se han relacionado con su metabolito reactivo sulfametoxazol-hidroxilamina (SMX-HA). Nuestro trabajo anterior ha demostrado que el aumento de la expresión de la proteína Tat del VIH-1 en las células T se correlaciona con el aumento de la apoptosis después de la incubación con SMX-HA. En este estudio buscamos determinar la región de la proteína Tat responsable de este efecto y el mecanismo por el cual Tat contribuyó a la apoptosis mediada por SMX-HA.
Métodos: Establecimos líneas celulares Jurkat T y Cos 7 que expresaban de manera estable Tat de longitud completa (Tat101) y mutantes por deleción (Tat86, Tat72, Tat48 y TatΔ). Estas líneas celulares luego se incubaron con SMX-HA y se analizaron para determinar la viabilidad celular y la producción de especies reactivas de oxígeno (ROS). Además, utilizamos la microscopía confocal para evaluar la distribución intracelular de las proteínas Tat y determinar si los cambios en la expresión y/o localización de proteínas clave del citoesqueleto contribuyeron a la apoptosis mediada por Tat después del tratamiento con SMX-HA.
Resultados: La eliminación de regiones de Tat que conducen a una mayor acumulación citoplasmática contribuyó significativamente a una mayor muerte celular en presencia de SMX-HA. El aumento de la muerte celular no requirió la inducción de ROS. El análisis cuantitativo también mostró que las líneas celulares que expresan Tat tenían niveles significativamente más bajos de β-actina y α-tubulina presentes tanto antes como después del tratamiento con SMX-HA. El aumento de la localización citoplasmática de Tat se correlacionó con mayores alteraciones en la distribución de los filamentos de actina.
Conclusión: La presencia de Tat citoplasmático en líneas de células T y epiteliales aumenta su sensibilidad a la muerte celular inducida por SMX-HA, un efecto mediado por los primeros 48 aminoácidos de TAT.