Revista de Oftalmología Clínica y Experimental
Acceso abierto

abstracto

Expresión génica de uroquinasa controlable en células de malla trabecular

Mei Tsuda, Shiho Kaneko, Akira Ando, Tetsuya Nishimura, Emiko Okuda-Ashitaka, Seiji Ito, Makoto Taomoto, Miyo Matsumura y Kanji Takahashi

Propósito: El glaucoma es un tipo de neuropatía óptica progresiva que finalmente conduce a la ceguera relacionada con la presión intraocular (PIO) elevada. La acumulación de matriz extracelular en la malla trabecular (TM) y los tejidos conectivos yuxtacanaliculares, que forman una vía de salida del humor acuoso, puede ser una de las principales causas del aumento de la PIO, por lo que el sistema fibrinolítico puede estar asociado con la regulación de la PIO. Examinamos la posibilidad de la transferencia controlable del gen del activador del plasminógeno de la uroquinasa (uPA) a las células de MT.
Métodos: Las células de MT se aislaron recientemente de ojos porcinos y células de MT humanas obtenidas durante procedimientos de trabeculectomía y se cultivaron. El ARN total se extrajo de células TM humanas y se transcribió inversamente en ADNc. A continuación, se realizó un método de reacción en cadena de la polimerasa con transcripción inversa (RT-PCR) para detectar la expresión génica de uPA. El ADNc de uPA humano se subclonó en un vector de expresión (vector pEYFP-N1) y un vector de expresión controlable (vector TRE-Tight), luego cada vector se transfectó independientemente en células TM porcinas cultivadas. Se añadió doxiciclina al medio de cultivo para activar los vectores pTet-ON y TRE-Tight. Finalmente, se examinó la expresión de uPA mediante un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA).
Resultados: Los hallazgos de ELISA revelaron la expresión de uPA (3,5 ng/ml) en medio de cultivo de TM porcina células que habían sido transfectadas con el gen uPA humano utilizando el vector pEYFP-N1. La doxiciclina indujo uPA humano en los vectores pTet-On y TRE-Tight con células TM cotransfectadas con el gen uPA humano de una manera dependiente de la dosis.
Conclusiones: Transferencia génica controlable de uPA, que puede degradar la matriz extracelular en el tejido conjuntivo yuxtacanalicular, en células TM se logró utilizando un sistema Tet-On. El presente método puede ser útil como una nueva terapia para el glaucoma.