Virología y Micología
Acceso abierto

abstracto

Construcción y detección de virus adeno-asociados recombinantes Co- Expresando PRRSV GP5, proteínas M y shRNA

Bin Yang, Xi Lan y Yan Qiu

El virus del síndrome respiratorio y reproductivo porcino (PRRSV) es una grave amenaza para la industria porcina y ha causado grandes pérdidas económicas en todo el mundo. Las vacunas de virus inactivado y atenuado que se utilizan actualmente tienen varias deficiencias, como la inseguridad y la baja tasa de protección, por lo que es urgente desarrollar una nueva vacuna. Para explorar y desarrollar una nueva vacuna contra PRRSV, se construyó un virus adenoasociado recombinante bifuncional que expresa proteínas ORF5 y ORF6, así como un ARN de interferencia corto (shRNA) contra ORF7. El shRNA contra ORF7 se insertó en la secuencia anterior al promotor U6 de pAAV-U6-IRES-hrGFP, y ORF5 y ORF6 se clonaron en la secuencia posterior al promotor CMV. Las células 293T que se cotransfectaron con este vector junto con pAAV-RC y pHelper produjeron un virus adenoasociado recombinante. Las células 293T transducidas con este virus recombinante expresaron proteínas GP5 y M, y las células Marc145 transducidas con este virus recombinante suprimieron la replicación de PRRSV. El título infeccioso del virus reconstruido fue de 1,9 × 1010 v.gmL según lo medido por el método de transferencia de puntos, y las proteínas GP5 y M se detectaron por transferencia Western. La construcción exitosa de rAAV-shRNA-ORF5-6 allana el camino para el desarrollo de nuevas vacunas bifuncionales contra PRRSV.