Revista de cromatografía y técnicas de separación
Acceso abierto
ISSN: 2157-7064
ISSN: 2157-7064
Rajamanickam V, Winkler M, Flotz P, Meyer L, Herwig C y Spadiut O
Peroxidasa de rábano picante (HRP), una glucoproteína que contiene hemo versátil que se usa con frecuencia en diagnósticos médicos, se aísla principalmente de la planta. Este proceso implica filtración, precipitación de sal y varios pasos de cromatografía, que es costoso, produce bajos rendimientos y produce mezclas de isoenzimas. Aunque las isoenzimas individuales se pueden producir de forma recombinante en Pichia pastoris, se hiperglicosilan en la levadura, lo que hace que el proceso posterior sea engorroso y, por lo tanto, no competitivo. En este estudio, analizamos la purificación de tres isoenzimas HRP que difieren en el número de sitios de N-glicosilación producidos de forma recombinante en P. pastoris. Queríamos 1) determinar las posibles correlaciones entre el modo de producción de proteínas y la calidad del producto resultante y el proceso posterior, 2) investigar las correlaciones entre el número de sitios de N-glicosilación de HRP y el modo de purificación, y 3) encontrar la purificación óptima estrategia para las isoenzimas HRP producidas recombinantemente. Por lo tanto, aplicamos diferentes estrategias de cultivo y probamos procesos posteriores empleando tanto resinas basadas en partículas como soportes monolíticos. Mostramos que el modo de cultivo afectó la pureza del producto pero no el proceso posterior posterior. La purificación de cada una de las tres isoenzimas HRP usando soportes monolíticos fue exitosa e independiente del número de sitios de N-glicosilación, mientras que la purificación con resinas basadas en partículas se vio muy afectada por la glicosilación. En resumen, demostramos una viabilidad novedosa de utilizar monolitos operados en modo de flujo continuo para la purificación de biomoléculas comparativamente pequeñas.