Revista de Toxicología Clínica
Acceso abierto

abstracto

Clonación y expresión del gen PirA de la cepa K5 de Vibrio parahaemolyticus que causa la enfermedad de necrosis hepatopancreática aguda en camarones patiblancos en células huésped de E. coli

Nguyen van Khanh, Tran Quoc Dung, Tran Quang Khanh van, Nguyen Quang Linh

La enfermedad de necrosis hepatopancreática aguda (AHPND) es una enfermedad bacteriana del camarón pata blanca, que tiene una alta tasa de mortalidad (100%) y pérdidas económicas. Nuestro objetivo fue identificar los genes que causan daño tóxico en células y órganos y aplicar bioproductos para prevenirlo. Se recolectaron camarones Litopenaeus vannamei de un estanque infectado en el centro de Vietnam y se analizaron en el Instituto de Biotecnología de la Universidad de Hue. El gen PirA de la cepa K5 de Vibrio parahaemolyticus se aisló y analizó la secuencia de nucleótidos, junto con el vector de expresión pQE30. El vector de expresión se transformó en E. coli M15, la proteína recombinante PirA se expresó en forma de proteína de fusión 6xHis-PirA de aproximadamente 15 kDa. La proteína recombinante PirA se purificó y se determinó la proporción de unión a PirAvp , la clonación y la secuenciación del gen PirA de Vibrio parahaemolyticus cepa K5 que causa AHPND por método PCR con cebadores específicos y pesos moleculares de PirAvp y el complejo PirAvp . El gen PirA de la cepa K5 de Vibrio parahaemolyticus se clonó en un vector pGEM-T easy (Promega, EE. UU.) y se examinó E. coli TOP10 colonias que contienen plásmido recombinante pGEM T easy/PirA en medio LB agar/ampicilina/IPTG/X-Gal. La PCR mostró una banda de aproximadamente 347 pb, que coincidía con el tamaño del gen PirA y dos secuencias de nucleótidos (BamHI y HindIII). Los resultados mostraron que el gen PirA tiene una longitud de 336 pb y es como el gen PirA en GenBank (Código: KU556825.1). Los resultados de la proteína extraída de E. coli M15 células recombinantes y 6xHis-PirA proteína diana se recogieron en fracciones de elución de EF2 a EF6, mostró que la concentración de 6xHis-PirA proteína y EF3 elución fracción recogió la mayor concentración de proteína (1.586,54 µg/ml). La proteína recombinante PirA purificada proporcionará materiales para la investigación de desarrollo para crear productos biológicos para prevenir y tratar AHPND.