Genómica y biología fúngica
Acceso abierto

abstracto

Caracterización de la glucocinasa-1 de Phytophthora infestans: una enzima versátil

Liara Villalobos-Pina, Hermes Balza, Hector Acosta, Diego Andrade-Alviarez, Ascanio Rojas, Luisana Avilan, Amaranta Gomez-Arreaza

Phytophthora infestans tiene siete genes que codifican glucocinasas, con el [PITG_06016] (PiGlcK-1) siendo el gen el de mayor expresión en las diferentes etapas de crecimiento. Sin embargo, su papel en el metabolismo de P. infestans aún no está claro. En este estudio clonamos, sobreexpresamos, purificamos y caracterizamos bioquímicamente esta enzima. La proteína recombinante purificada tiene una Km de 0,66 mM y 2,2 mM para glucosa y ATP, respectivamente. PiGlcK-1 es capaz de fosforilar la fructosa, aunque solo en un 48% con respecto a la glucosa, utilizando ADP y pirofosfato (PPi) como donante de grupos fosforilo. Estas moléculas son un 50% y un 11% menos efectivas que el ATP, respectivamente. Además, PiGlcK-1 puede ser activado por PPi aumentando su actividad 3,6 o 2,5 veces cuando el donante de fosforilo es ATP o ADP, respectivamente. PiGlcK-1 puede formar complejos oligoméricos y estos tienden a disociarse espontáneamente, teniendo el monómero la mayor actividad. Esta oligomerización se puede desestabilizar con ditiotreitol que aumenta al doble la actividad de PiGlcK-1. Estos resultados revelan que PiGlcK-1 es una enzima versátil que podría desempeñar un papel importante en el uso de los azúcares disponibles durante la primera etapa de la infección, así como en la etapa necrotrófica, y sugiere una posible regulación mecanismo contra posibles condiciones de estrés oxidativo.