Revista de Proteómica y Bioinformática
Acceso abierto

abstracto

Aplicación de la separación de perlas magnéticas/espectrometría de masas MALDI-TOF al análisis del proteoma del líquido lagrimal humano

Eiichi Sekiyama, Yumiko Matsuyama, Daisuke Higo, Takashi Nirasawa, Masaya Ikegawa, Shigeru Kinoshita y Kei Tashiro

Las proteínas y los péptidos de las lágrimas desempeñan un papel importante en la preservación de la integridad y la estabilidad de la superficie ocular. El análisis proteómico de las películas lagrimales nos permitirá detectar marcadores biológicos tempranos de enfermedades oculares, sin embargo, a menudo se ve obstaculizado por la pequeña cantidad de volumen lagrimal y la baja concentración de proteínas. Aquí adoptamos la purificación basada en perlas magnéticas (sistema ClinProt) seguida de espectrometría de masas de tiempo de vuelo de desorción/ionización láser asistida por matriz (MALDI-TOF-MS) para perfilar proteínas de lágrimas humanas. Se recogieron fluidos lagrimales basales y reflejos de voluntarios sanos normales utilizando tubos microcapilares de vidrio. Se aplicaron perlas magnéticas de fase reversa (C8) y de intercambio catiónico débil (WCX) para obtener múltiples componentes detectados como señales claras. El análisis de componentes principales mostró una clara diferenciación entre lágrimas basales y reflejas. Entre las alteraciones clave, dos picos marcadamente aumentados en los fluidos lagrimales reflejos en m/z 2422,12 ym/z 2721,29 se analizaron posteriormente mediante análisis de EM en tándem y su fuente fue la proteína 4 rica en prolina (PRP4). Concluimos que la separación basada en perlas magnéticas combinada con MALDI-TOF-MS (ClinProt MALDI-TOF) parece ser ideal para la detección de primera línea de péptidos y proteínas en lágrimas.