Técnicas Avanzadas en Biología y Medicina
Acceso abierto

abstracto

Análisis del polimorfismo del receptor de andrógenos humano utilizando la técnica de cambio de movilidad híbrida en bucle fluorescente

Tomokazu Ishikawa, Shoichi Matsukuma, Mitsuyo Yoshihara, Tatsuo Kurosawa y Yohei Miyagi

Se introdujo una técnica de cambio de movilidad híbrida en bucle fluorescente (LH-MS) para el análisis de sitios polimórficos en el exón 1 del gen del receptor de andrógenos humano . Se asumió que los bucles (CAG)17-31 o (CTG)17-31 sobresalían de las cadenas con sentido o antisentido de los productos de PCR después de la hibridación con sondas de LH inversas o directas, respectivamente. Cuando se analizó una matriz de ADN masculino utilizando sondas de LH marcadas con Cy5, se estableció una correlación lineal única entre las longitudes de repetición de CAG y las posiciones de la banda de LH fluorescente en geles de poliacrilamida. Estos patrones de bandas que cambian linealmente se usaron para ensamblar marcadores de tamaño de escalera LH de longitudes de repetición CAG. El análisis del ADN femenino reveló que el 87 % de las mujeres son heterocigotas para los polimorfismos repetidos de CAG, lo que podría ser informativo para el análisis de clonalidad de tumores en pacientes con cáncer femenino. Como prueba de principio, se examinó el ADN del tumor colorrectal femenino heterocigoto con la técnica de LH-MS fluorescente y se mostró claramente la pérdida de un alelo después del tratamiento con la enzima de restricción sensible a la metilación HpaII.