Revista de cromatografía y técnicas de separación
Acceso abierto

abstracto

Un método de HPLC mejorado para la cuantificación de metanefrina con detección culombimétrica

Pedro AQ, Soares RF, Oppolzer D, Santos FM, Rocha LA, Goncalves AM, Bonifacio MJ, Queiroz JA, Gallardo E y Passarinha LA

Se desarrolló y validó un método analítico rápido y directo, basado en el uso de RP-HPLC con detección culombimétrica, para la cuantificación de metanefrina, un O-metilado producto en ensayos enzimáticos de catecol-Ometiltransferasa. La separación isocrática se logró en una columna inversa con una fase móvil compuesta por dihidrogenofosfato de sodio 0,1 M, monohidrato de ácido cítrico 0,024 M, octilsulfato de sodio 0,5 mM y acetonitrilo al 9% (%v/v). Se encontró que el método era lineal entre 0,25 y 15 nmol/mL con un coeficiente de determinación de 0,9997 para metanefrina. La precisión y la exactitud intradía e interdiaria se ajustaron a los criterios aceptados en la validación de métodos bioanalíticos y el LOD y el LLOQ fueron de 0,25 nmol/ml. El enfoque principal del método desarrollado es el LLOQ más bajo logrado que puede tener implicaciones importantes en la investigación de laboratorio para las determinaciones de actividad de COMT, en particular para la variante de metionina 108/158 obtenida de extractos nativos o recombinantes. Otra gran ventaja del presente método son los tiempos de ejecución más cortos en los sistemas cromatográficos automatizados que permiten el análisis de varias muestras en poco tiempo. Además, la metanefrina fue estable en las muestras durante al menos 24 h a temperatura ambiente, durante al menos 24 h en el inyector del sistema HPLC y durante al menos tres ciclos de congelación/descongelación. El método desarrollado demostró una mayor sensibilidad, precisión, exactitud, estabilidad y linealidad en comparación con los métodos descritos anteriormente. Finalmente, una catecol-O-metiltransferasa