Espectrometría de masas y técnicas de purificación
Acceso abierto

abstracto

Un método espectrométrico de masas de inyección de flujo simple de diluir y disparar para la cuantificación de ácido glicocólico en la bilis humana

Raghavi Kakarla, Ramakrishna Reddy Voggu, Janet Donaldson y Baochuan Guo

Los niveles de ácido glicocólico están elevados en la bilis de los pacientes con colangiocarcinoma, lo que lo convierte en un biomarcador potencial de la enfermedad. La utilidad de los métodos basados en espectrometría de masas de cromatografía líquida para la cuantificación de ácido glicocólico a menudo sufre de pasos de extracción que consumen mucho tiempo, arrastre y falta de disponibilidad de matriz biliar en blanco. Para superar los problemas, desarrollamos un método de espectrometría de masas en tándem de inyección de flujo diluido y disparado (basado en la adición estándar) para la cuantificación del ácido glucocólico en la bilis. Primero se diluyó la bilis, seguido de añadir el patrón de ácido glicocólico y el patrón interno a la bilis diluida, que luego se inyectó directamente (sin separación cromatográfica) en la fuente de ionización por electropulverización. La detección se llevó a cabo en modo de monitorización de reacciones múltiples negativas con transiciones m/z establecidas en 464,1→74,0 y 401,2→249,1 para ácido glicocólico y patrón interno, respectivamente. Se construyó una curva de calibración de adición estándar para determinar la cantidad de ácido glicocólico presente en la bilis humana. El método ha sido validado con muestras clínicas según las directrices de la FDA. La linealidad se logró en el rango de concentración enriquecido de 12,5 a 200 ng/mL con un coeficiente de correlación de 0,9857. El método tiene buena exactitud, precisión, efecto de matriz mínimo y es suficientemente sensible para cuantificar el ácido glucocólico incluso después de una dilución de 800.000 veces. En conclusión, se ha desarrollado y validado por primera vez un método de MS/MS de inyección de flujo diluido y disparado, que podría usarse en el análisis de rutina de ácido glucocólico en la bilis humana en un entorno clínico.