Investigación inmunológica
Acceso abierto

abstracto

Una estrategia novedosa para la identificación de antígenos que son reconocidos por células T citotóxicas restringidas por MHC de clase I bovinas en una infección por protozoos usando vacunología inversa

Simon P Graham, Yoshikazu Honda, Roger Pellé, Duncan M Mwangi, E Jane Glew, Etienne P de Villiers, Trushar Shah, Richard Bishop, Pierre van der Bruggen, Vishvanath Nene and Evans LN Taracha

Antecedentes: Se ha demostrado previamente que la inmunidad contra el parásito protozoario bovino Theileria parva está mediada por la lisis células infectadas por parásitos por linfocitos T citotóxicos CD8+ restringidos por MHC de clase I. Se supone que la identificación de antígenos de esquizontes diana de CTL ayudará al desarrollo de una vacuna de subunidades. Aprovechamos la disponibilidad de los datos completos de la secuencia del genoma y las herramientas bioinformáticas para identificar genes que codifican proteínas secretadas o ancladas en la membrana que pueden ser procesadas y presentadas por las moléculas MHC de clase I de las células infectadas a CTL. Resultados: De los 986 marcos de lectura abiertos (ORF) predichos codificados por el cromosoma 1 del genoma de T. parva, 55 se seleccionaron en función de la presencia de un péptido señal y/o un dominio de hélice transmembrana. Treinta y seis ORF seleccionados se clonaron con éxito en un vector de expresión eucariota, se transfectaron transitoriamente en fibroblastos de piel bovina inmortalizados y se examinaron in vitro utilizando CTL específicos de T. parva. El reconocimiento de los productos génicos por CTL se evaluó utilizando un IFN-γ; Ensayo ELISpot. Un ORF de 525 pares de bases que codifica una proteína de 174 aminoácidos, denominada Tp2, se identificó mediante CTL específico de T. parva de 4 animales. Estos CTL reconocieron y lisaron fibroblastos de piel transfectados con Tp2 y reconocieron 4 epítopos distintos. De forma significativa, se observaron respuestas de células T CD8+ específicas de Tp2 durante la respuesta inmunitaria protectora contra la exposición a esporozoitos. Conclusión: La identificación de un antígeno que contiene múltiples epítopos de CTL y su aparente inmunodominancia durante una respuesta antiparasitaria protectora convierte a Tp2 en un candidato atractivo para la evaluación de su potencial vacunal.