Revista de Proteómica y Bioinformática
Acceso abierto

abstracto

Un nuevo enfoque de mapeo de epítopos por espectrometría de masas sin inmovilización del anticuerpo

R. F. El-Kased, C. Koy, P. Lorenz, H. Montgomery, K. Tanaka, H.-J. Thiesen y MO Glocker

Se describe el desarrollo y la aplicación de un procedimiento de mapeo de epítopos basado en espectrometría de masas en solución y sin inmovilización del anticuerpo. Los antígenos se digirieron con proteasas. Luego se llevó a cabo cromatografía de microcolumna de exclusión por tamaño (SEC) antes y después de la exposición de las mezclas de péptidos a anticuerpos monoclonales. El péptido que contiene el epítopo, unido por afinidad al anticuerpo y, por tanto, formando un complejo estable, eluyó pronto como todos los componentes de gran masa, mientras que todos los péptidos de baja masa no unidos eluyeron tarde. La comparación de los perfiles de elución en presencia y ausencia del anticuerpo mostró un cambio solo para los péptidos portadores de epítopo, lo que permitió la identificación directa del epítopo. Los antígenos recombinantes fibrillarin y RA33 que contenían etiqueta His se usaron en combinación con un anticuerpo monoclonal anti-etiqueta His para desarrollar el método. La aplicación de este método para la determinación de un epítopo en RA33 contra el que se dirigió un anticuerpo monoclonal identificó la secuencia del epítopo (85IDGRVVEPKRA95) usando secuenciación de péptidos MS/MS. Las ventajas de este enfoque incluyen un bajo consumo de muestras, pocos pasos de manipulación y una breve duración del análisis. Con nuestro método, nuestro objetivo final es desarrollar un procedimiento de detección para identificar epítopos principales en pacientes que puedan ser adecuados en el futuro para la estratificación de pacientes, necesarios para terapias personalizadas.