Revista de Síndromes Genéticos y Terapia Génica
Acceso abierto

abstracto

Una estrategia de vector dual viral asociado a adeno fragmentado para el tratamiento de enfermedades causadas por mutaciones en genes grandes conduce a la expresión de transcritos híbridos

Michelle E McClements, Peter Charbel Issa, Véronique Blouin y Robert E MacLaren

Objetivo Los sistemas AAV de vector dual se utilizan para permitir la terapia génica para trastornos en los que el gen de la es demasiado grande para caber en una sola cápside. Los vectores virales adenoasociados fragmentados (fAAV) que contienen transgenes truncados de repetición terminal invertida única se han considerado como una estrategia de reemplazo de genes de este tipo. Aquí nuestro objetivo es contribuir a la comprensión actual de los mecanismos moleculares empleados por los sistemas de vector dual fAAV. Métodos Se empaquetaron construcciones transgénicas sobredimensionadas (>8kb) que contenían la secuencia codificante de ABCA4 como fragmentos truncados de <5kb de tamaño en varios serotipos de AAV. Las transducciones in vitro con estas preparaciones de vectores fAAV se realizaron con ARNm y productos de expresión de proteínas evaluados mediante técnicas de RT-PCR, qPCR y western blot. Resultados Las transducciones con preparaciones de vectores fAAV produjeron ARNm de ABCA4, pero no generaron niveles detectables de proteína. La secuenciación de la población de transcritos reveló la presencia de ABCA4 CDS de longitud completa con variantes híbridas de ABCA4 adicionales, lo que indica que los transgenes truncados sin regiones de superposición se estaban uniendo y formando transgenes híbridos estables. Por el contrario, un sistema de vector dual (OV) superpuesto de ABCA4 con una región complementaria definida generó solo transcripciones de ARNm de longitud completa más proteína ABCA4 detectable. Conclusión A pesar del éxito anterior demostrado con el enfoque de fAAV, la falta de repetibilidad e identificación de transcritos híbridos estables capaces de producir proteínas sugiere que se requiere más refinamiento antes de considerar este enfoque en un entorno clínico.