Revista de Farmacia Aplicada
Acceso abierto

abstracto

Una estabilidad de cuatro dimensiones (4D) que indica la optimización del método analítico y la predicción del ensayo de potencia mediante el seguimiento de picos de MS y UV

Blasko A, Tam J, Ahmad IAH, Gunasekera S, Oshchepkova I, Galin, Andrey Vazhentsev A, Tashlitsky V y Adams D

Se utilizó un total de 60 picos generados por la degradación forzada de tres ingredientes farmacéuticos activos (API) para la columna selección en el desarrollo de un método analítico HPLC-UV indicador de estabilidad usando seguimiento de picos LC-UV y LC-MS. Se evaluaron dos aditivos de fase móvil y dos modificadores orgánicos mientras se seleccionaba una lista de columnas cromatográficas cuidadosamente seleccionadas. Se utilizó el cribado de columnas y se seleccionó la mejor columna en función del número total de picos resueltos, resoluciones, anchos de pico y formas de pico. Se usó TFA al 0,1 % en ACN/agua para el cribado inicial y la optimización del perfil de gradiente. También se evaluaron tres concentraciones diferentes de TFA en ACN/agua. La concentración óptima de TFA, 0,10 % (8,77 mM), se consideró óptima para una mayor optimización del gradiente en función de la resolución de los pares críticos. Después de la selección de la columna, la fase móvil y la selección del modificador de fase móvil (TFA), se logró la optimización del gradiente mediante una combinación de seguimiento de picos quimiométricos automatizado y decisiones basadas en software en AutoChrom MS. Las ecuaciones de retención de pico correctas (es decir, el tiempo de retención frente a la relación de fase móvil) se generaron utilizando los primeros gradientes de un paso con un amplio rango de % B seguido de la optimización en gradientes de varios pasos. Se encontró que la extrapolación, utilizando modelos de retención cuadrática, puede dar lugar a grandes errores en las predicciones del tiempo de retención (tR), especialmente para componentes mal retenidos. Presentamos los desafíos para resolver los pares de resolución críticos, incluidos aquellos con la misma m/z, la sobreestimación y los errores de predicción del software, y por qué el modelo de picos (es decir, la precisión de los predichos experimentales). ) fallan en los extremos del gradiente. Al usar este enfoque, pudimos generar un método cromatográfico indicador de estabilidad adecuado para una muestra extremadamente desafiante que consta de tres ingredientes farmacéuticos activos (API) y productos de degradación relacionados con una amplia gama de hidrofobicidad. Los API eran compuestos internos, su identidad está oculta en este documento y no son relevantes para el propósito del estudio. Hubo buenas coincidencias entre los tiempos de retención predichos y experimentales de los picos rastreados. El modelo de pico se usó para generar un método de ensayo/potencia utilizando solo la herramienta computacional.