Revista de Oftalmología Clínica y Experimental
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abstracto

Electroforesis en gel diferencial bidimensional (2D-DIGE) revela proteínas asociadas con redes de actina reticulada en células de malla trabecular humana

Jaclyn Y Bermúdez, Hannah C Webber, Gaurang C Patel, Liang-Jun Yan, Abbot F Clark y Weiming Mao

Antecedentes: El principal factor de riesgo para El glaucoma de ángulo (GPAA) es el aumento de la presión intraocular (PIO). En pacientes con GPAA, la resistencia al flujo de salida a través de la malla trabecular (TM) está anormalmente elevada. Uno de los cambios patológicos importantes asociados con el glaucoma en la TM es la formación de redes de actina reticulada (CLAN) excesivas. Los CLAN son estructuras poligonales en forma de red que se encuentran en células y tejidos de glaucoma TM confluentes. Los factores asociados al glaucoma que transforman la formación del factor de crecimiento beta 2 (TGFβ2) y los glucocorticoides inducen la formación de CLAN en células TM sin glaucoma (NTM). Los CLAN pueden aumentar la rigidez celular y alterar la homeostasis y, por lo tanto, contribuir a una PIO elevada.

Métodos: Utilizamos un enfoque proteómico para identificar las proteínas asociadas a CLAN. Tratamos células NTM primarias confluentes con etanol al 0,1 % (EtOH; vehículo), dexametasona 100 nM (DEX) o TGFβ2 5 ng/ml más EtOH al 0,1 % durante 7 días para inducir CLAN. La fracción insoluble de Triton que contenía el citoesqueleto se extrajo mediante electroforesis en gel diferencial bidimensional (2D-DIGE). Se utilizó espectrometría de masas (MS) para identificar las proteínas expresadas diferencialmente en los geles 2D. La colocalización de proteínas identificadas con CLAN se confirmó mediante microscopía de inmunocitofluorescencia (ICF).

Resultados: 2D-DIGE reveló 103 proteínas expresadas diferencialmente en ambos grupos de tratamiento. MS identificó 23 de las proteínas más enriquecidas. ICF mostró que caldesmon, calponina, cadena ligera de miosina y tropomiosina se colocalizaron con CLAN.

Conclusiones: Identificamos un subconjunto de proteínas expresadas diferencialmente en células NTM con formación de CLAN inducida por DEX o TGFβ2. La participación potencial de estas proteínas en la formación y/o el mantenimiento de CLAN requiere más investigación. Estas proteínas pueden proporcionar nuevos conocimientos sobre la patogenia del glaucoma.