Andrología-Acceso Abierto
Acceso abierto

abstracto

Nivel de condensación de la cromatina espermática: según los fijadores

Tulay Irez, Tugce Durmus

La cromatina espermática sufre cambios estructurales durante la espermatogénesis, lo que provoca una alta condensación. Este intercambio nuclear se considera un predictor de la capacidad de fertilización de los espermatozoides y el resultado del embarazo. Varios estudios han demostrado una relación entre la infertilidad masculina y la deficiencia de protamina en el esperma, y se ha sugerido que puede ser un determinante importante de la integridad del ADN del esperma. La tinción con azul de anilina ácida se usa a menudo con la fijación con glutaraldehído y tiñe las histonas debido a la lisina en el núcleo del espermatozoide. La investigación ha demostrado que el nivel de histonas en los núcleos de los espermatozoides está estrechamente relacionado con el daño al ADN y la infertilidad. La condensación de la cromatina espermática se expresa por la presencia de protamina en el núcleo espermático, es decir, la ausencia de histonas. En este estudio, investigamos cómo el método de tinción con azul de anilina puede determinar correctamente la condensación de la cromatina espermática cuando se aplican diferentes métodos de fijación. En este estudio se utilizaron cuatro fijadores diferentes. Los fijadores se aplicaron con glutaraldehído (2,5 %), metanol/ácido acético Carney’s, (3/1), alcohol etílico (98 %) y formaldehído (10 %), colorante azul de anilina aplicado a concentraciones convencionales en preparaciones citológicas. De estos fijadores, el glutaraldehído se usa ampliamente para mostrar histonas espermáticas. Se realizaron pruebas T de Student y análisis de varianza de medidas repetidas para calcular las diferencias en las tasas de condensación de cromatina (azul de anilina negativo) entre diferentes fijadores. Cuando se compararon los valores de condensación de la cromatina obtenidos con la fijación con glutaraldehído con los obtenidos con la fijación con metanol y alcohol, se observaron diferencias estadísticamente significativas (p=0,014,p=0,0001). Se observó una correlación positiva entre glutaraldehído y formaldehído (p=0,51), y una correlación negativa entre glutaraldehído y formaldehído, fijación de metanol/ácido acético y alcohol (p=0,005,p=0,0005 Ve p=0,0005,p=0,007). Se determinó la correlación positiva de la condensación de cromatina con la concentración y motilidad espermática (p=0,012,p<0,001). De acuerdo con los resultados obtenidos en este estudio, las fijaciones de glutaraldehído al 2,5% y formaldehído al 10% fueron apropiadas para determinar la condensación de cromatina con azul de anilina, pero el metanol/ácido acético y el alcohol etílico no son adecuados para este propósito. Se observó que los fijadores a base de alcohol que probamos en nuestro estudio no mostraron específicamente la lisina espermática y provocaron que todo el núcleo se tiñera con azul de anilina.