Revista de glucómica y lipidómica
Acceso abierto

abstracto

Espectrometría de masas de desorción/ionización láser cuantitativa asistida por matriz de glicopéptidos derivados de pireno para la investigación de la glucómica de células de mamíferos

Toshio Nakamura, Takashi Nishikaze, Hiroshi Jinmei, Fumio Tougasaki, Ichiro Sugimoto y Junko Amano

El glicano es una de las principales biomoléculas ricas en información. Las alteraciones en los N-glicanos se pueden asociar con muchas enfermedades, incluido el cáncer, y se observan a menudo en el suero de los pacientes afectados. Como ejemplo, el antígeno prostático específico (PSA) es una glicoproteína secretada por las células epiteliales prostáticas. El ensayo de PSA en suero se usa ampliamente para la detección del cáncer de próstata (PCa). La detección de PSA glicano alterado se considera un diagnóstico preciso. Sin embargo, la cantidad limitada de PSA en suero disponible dificulta la determinación detallada de las estructuras de glucano, ya que el nivel de PSA en suero es muy bajo.

La espectrometría de masas (MS) es una poderosa herramienta para analizar estructuras de glicanos. Recientemente hemos establecido un MS altamente sensible tanto para glucanos como para glucopéptidos mediante derivatización de pireno. Se compararon los espectros de masas de glicanos derivatizados con pireno butanoico ácido hidrazida (PBH) con desorción/ionización por láser asistida por matriz con trampa de iones cuadrupolo en tiempo de vuelo (MALDI-QIT-TOF) con los de glicanos piridilaminados (PA). Cada glicano derivatizado se preparó a partir de la misma cantidad de PSA comercial. Los glicanos de PSA marcados con PBH mostraron una intensidad de señal más alta con menos fragmentación en comparación con los glicanos de PA, y dieron espectros con una alta relación s/n (tanto en modos de iones positivos como negativos). Para la derivatización de los glicopéptidos, se utilizó pirenil diazometano (PDAM). Las señales de glucopéptidos se potenciaron mucho mediante esta derivatización. Se pudieron determinar glicopéptidos PDAM preparados a partir de aproximadamente 10 ng de PSA.

En este estudio, demostramos que el análisis de MS mediante la derivatización de pireno proporciona una mayor sensibilidad y estabilidad tanto para los glicanos como para los glucopéptidos, en comparación con la HPLC y la cromatografía de afinidad con lectina; además, se obtuvieron resultados comparables a los observados con los otros métodos. Por lo tanto, concluimos que nuestro método es útil para la investigación de la glucómica de células de mamíferos.