Revista de Glicobiología
Acceso abierto

abstracto

Cromatografía de afinidad de lectina de flujo: un modelo con aglutinina de Sambucus nigra

M Luisa S Silva, Catarina Gomes y M Beatriz Quinaz Garcia

El estudio de los proteomas se ha convertido en una forma importante de evaluar los cambios que ocurren en las condiciones de la enfermedad. No obstante, el predominio de proteínas séricas muy abundantes complica significativamente el descubrimiento y análisis de glicoproteínas poco abundantes que pueden constituir biomarcadores potenciales de enfermedades. Se han utilizado varias técnicas para realizar la partición del proteoma sérico, como la cromatografía de afinidad basada en proteína A y G, IgY aviar, anticuerpos monoclonales y lectinas. Las lectinas son particularmente adecuadas para unir y aislar selectivamente ciertas estructuras de glicanos presentes en muestras complejas como las biológicas. La lectina captura de forma reversible las glicoproteínas con una glicoestructura particular presente en la muestra en diferentes tasas de abundancia, lo que produce, después de la elución, un conjunto enriquecido de glicoproteínas para estudios glicoproteómicos.

Sin embargo, la cromatografía de afinidad con lectina (LAC) para aplicaciones bioquímicas se lleva a cabo principalmente en condiciones por lotes, lo que implica un tiempo de procedimiento prolongado, reactivos o columnas costosos y equipos o instalaciones especiales. Este trabajo propone el desarrollo de un procedimiento LAC de flujo hecho en laboratorio y fácil de implementar, utilizando aglutinina de Sambucus nigra (SNA) inmovilizada en perlas de agarosa para aislar el glucano STn (un biomarcador de pancarcinoma) presente en glicoproteínas del suero de pacientes con cáncer. En condiciones de flujo, el procedimiento LAC propuesto permite la automatización del proceso, especialmente importante cuando es necesario ejecutar varias muestras. Además, el sistema de flujo no requiere instalaciones costosas ni personal experimentado, y se puede adaptar para realizar LAC con cualquier lectina, según el propósito del análisis glicoproteómico.

Importancia: Este trabajo tiene como objetivo demostrar la viabilidad y los beneficios de realizar la cromatografía de afinidad con lectina en condiciones de flujo y con un colector de flujo muy simple, en comparación con el procedimiento por lotes que generalmente se lleva a cabo en bioquímica y bioquímica. Laboratorios de Biología Molecular. La facilidad de implementación de este sencillo manifold, sin necesidad de costosos equipos o instalaciones, permite su uso en cualquier laboratorio, incluso en aquellos con limitaciones económicas. Se señalan varias ventajas de la metodología desarrollada, frente al uso de procedimientos por lotes o kits o columnas comerciales, especialmente cuando es necesario realizar análisis de rutina.