Revista de cromatografía y técnicas de separación
Acceso abierto

abstracto

Evaluación de Seis Protocolos para la Extracción de Proteínas de Panículas Jóvenes de Arroz por Electroforesis bidimensional

Huang X, Zhou H.

RESUMEN

Para la mayoría de los enfoques de proteómica informados, la extracción de proteínas y la preparación de muestras son de vital importancia para obtener resultados óptimos. Sin embargo, la extracción de proteínas de los tejidos de las plantas de cultivo sigue siendo un gran desafío debido al bajo contenido de proteínas y la abundancia de metabolitos secundarios que interfieren de manera prominente con el enfoque isoeléctrico y el posterior análisis proteómico. Hasta ahora, ningún intento se ha centrado en la comparación de los procedimientos de extracción de proteínas a partir de panículas jóvenes de arroz. Para establecer un protocolo de extracción de proteínas de alta eficiencia adecuado para la electroforesis bidimensional (2-DE) en panículas jóvenes de arroz, se evaluaron seis protocolos para la preparación de proteínas: (1) extracción con fenol; (2) extracción de Mg/ Nonidet P-40 (NP-40); (3) Tris-Base/precipitación de acetona; (4) extracción de SDS; (5) extracción con ácido tricloroacético (TCA)/acetona/fenol; (6) precipitación con TCA/acetona. El estudio demuestra explícitamente que el método TCA/acetona/fenol proporciona una mayor eficacia de extracción de proteínas a partir de panículas jóvenes de arroz que otros protocolos en términos de la mayor calidad del gel 1-DE, el número máximo (450) de manchas de proteínas bien resueltas , mayor resolución y abundancia de puntos. Además, estos métodos también generaron patrones de manchas de proteínas de electroforesis en gel bidimensional notablemente diferentes. Veintinueve de las 30 proteínas extraídas diferenciales visibles se identificaron mediante análisis MALDI-TOF-MS/MS y se dividieron en ocho categorías según la función molecular. Los datos acumulados sugirieron que los diferentes métodos de extracción requieren respectivamente ciertos tejidos vegetales especiales debido a las diferentes propiedades fisicoquímicas de cada protocolo. En general, este estudio, que se presenta en este documento, facilitará proporcionar una piedra angular del análisis proteómico comparativo de panículas jóvenes de arroz, incluidos otros tejidos vegetales complicados.