Revista de cromatografía y técnicas de separación
Acceso abierto

abstracto

Evaluación de las fuerzas impulsoras para la partición de proteínas en sistemas de dos fases acuosas de sal-PEG y optimización mediante el diseño de experimentos

Glyk A, Solle D, Scheper T y Beutel S*

En el presente estudio, la partición de cuatro proteínas modelo (albúmina sérica bovina, ovoalbúmina, α-quimotripsina y lisozima) se investigó en sistemas bifásicos acuosos de sal de polietilenglicol (PEG) (ATPS) abordando los efectos del peso molecular (MW) y la concentración de PEG, tipo de sal formadora de fase (fosfato de potasio/citrato de sodio (KPP/NaCit) ) y concentración, concentración de cloruro de sodio (NaCl) y pH, así como PM, punto isoeléctrico, carga e hidrofobicidad de las proteínas. Se encontró que la partición de proteínas estaba influenciada por diferentes efectos coexistentes, como interacciones hidrofóbicas y electrostáticas, relacionadas con los parámetros del sistema y las propiedades fisicoquímicas/superficiales de las proteínas. Además, se realizó un riguroso análisis y optimización de las fuerzas significativas para la partición de proteínas en PEG-sal ATPS mediante diseño de experimentos (DoE). Inicialmente, las concentraciones de KPP/NaCit, NaCl y PEG se consideraron como factores estadísticamente significativos mediante un diseño factorial fraccionado. Posteriormente, los valores óptimos de los factores significativos se determinaron mediante un diseño centrado en la cara compuesta central junto con la metodología de superficie de respuesta. Además, se obtuvieron modelos lineales y cuadráticos en los diseños experimentales, respectivamente, y evaluados mediante análisis de regresión estadística y análisis de varianza. Finalmente, una validación del modelo cuadrático confirmó una buena correlación entre los resultados previstos y experimentales, verificando así la validez del modelo.