Revista de cromatografía y técnicas de separación
Acceso abierto

abstracto

Desarrollo de ensayo de PCR en tiempo real específico para COL3A1 para aplicaciones clínicas y de detección deportiva

Martínez B, Jiménez A, Díaz T, Segura J y Ferro P*

PIIINP, cuyo gen es COL3A1, es una proteína utilizada como biomarcador, que se encuentra alterada en diversas patologías como el hígado graso de origen alcohólico y también se utiliza para detectar el abuso de la hormona de crecimiento recombinante humana (rhGH) por parte de atletas de élite para mejorar su rendimiento. Por tanto, el estudio de los niveles de esta proteína o de su gen podría ser útil para el diagnóstico de estas patologías, además de otros usos. El objetivo de este trabajo fue el desarrollo de un nuevo método de detección del gen COL3A1 basado en la cuantificación de ARNm en tiempo real. A 10 voluntarios varones sanos se les inyectó por vía intravenosa durante 3 días consecutivos 0,026 mg-1kg-1día-1persona-1 de rhGH, y se recogieron muestras de suero y sangre durante 7 días en diferentes momentos. La extracción del ARNm se realizó tras la purificación de los linfocitos siguiendo protocolos estándar, y las muestras se cuantificaron mediante PCR cuantitativa en tiempo real utilizando sondas TaqMan diseñadas específicamente para este gen. Los resultados mostraron un aumento en la expresión de COL3A1 que se mantuvo durante los 7 días de muestreo posteriores a la última administración, observándose resultados más sensibles y robustos al compararlos con la cuantificación de la proteína PIIINP en suero de los mismos individuos. Luego del montaje del ensayo, se realizó una validación parcial en la que se estudiaron parámetros como linealidad, variación inter e intraensayo, influencia del sexo y la edad, estabilidad del almacenamiento de muestras de sangre a 4°C y cantidad de muestra de sangre. .