Revista de glucómica y lipidómica
Acceso abierto

abstracto

Caracterización de N-miristoiltransferasas en embriones de vertebrados mediante el uso de pez cebra: aparición de N-miristoiltransferasa 1 de bajo peso molecular en el desarrollo temprano

Hajime Nakatani, Natsuki Nukada, Eriko AvÅar-Ban, Hisayoshi Ishikawa, Shin’ichi Akiyama y Yutaka Tamaru

Como primer paso para explorar las características biológicas de los NMT durante la embriogénesis de los vertebrados, se concentró en el pez cebra como un modelo útil de organismos superiores. Mediante el análisis in silico de las secuencias de aminoácidos, encontramos que el pez cebra NMT1 (zNMT1) y zNMT2, que se traducen de los genes nmt1a y nmt2, tenían una alta homología con NMT1 y NMT2 humanos o de ratón, respectivamente. El análisis de expresión de nmt1a y nmt2 por RT-PCR y transferencia de ARN reveló que ambos genes se expresaron durante el desarrollo temprano, y la expresión de nmt2 fue una de las principales etapas iniciales de desarrollo. La inhibición de zNMT por el ácido 2-hidroximirístico (2-OHMyr) en el desarrollo temprano resultó letal para el embrión. El oligo morfolino antisentido contra nmt1a causó la detención del desarrollo en la etapa temprana de epibolia. Esos resultados sugieren que las zNMT son necesarias para el desarrollo después de la etapa inicial de epibolia. A continuación, se preparó el zNMT1 recombinante y se confirmó su actividad de N-miristoiltransferasas. Finalmente, analizamos la expresión de proteínas zNMT1 en embriones en varias etapas de desarrollo y encontramos que zNMT1 de bajo peso molecular (29 kDa), que incluía la parte N-terminal de zNMT1, apareció específicamente durante el desarrollo embrionario. La expresión de zNMT1 de longitud completa fusionada con la etiqueta myc-His en su terminal C dio como resultado la producción de proteína de bajo peso molecular (35 kDa). La detección de NMT intactos en el extracto de proteína de embriones tempranos mostró que existían NMT de bajo peso molecular con actividad de unión al sustrato. A partir de estos hallazgos, concluimos que las zNMT, como la de los mamíferos, también son esenciales para el desarrollo del pez cebra, y que la zNMT1 de bajo peso molecular apareció específicamente en la etapa temprana de desarrollo. Esas isoformas podrían desempeñar un papel importante en los procesos de desarrollo en embriones tempranos.