Revista de Toxicología Clínica
Acceso abierto
ISSN: 2161-0495
ISSN: 2161-0495
Frey Francisco Romero-Vargas, Thalita Rocha, Maria Alice Cruz-Höfling, Lea Rodrigues-Simioni, Luis Alberto Ponce-Soto and Sergio Marangoni
En esta investigación se realizó una identificación preliminar y una caracterización bioquímica y biológica de un PLA2 (Btae TX-I) del veneno de una serpiente víbora, Bothriopsis taeniata (Víbora de fosa manchada del bosque). Btae TX-I se purificó mediante dos pasos cromatográficos, cromatografía de exclusión molecular seguida de cromatografía analítica HPLC de fase inversa. La masa molecular se comportó como una proteína monocatenaria homogénea en SDS–PAGE, confirmado por espectrometría MALDI-TOF, indicando una masa molecular de 13889,98 Da. Los péptidos trípticos se determinaron en espectrometría de masas en tándem y mostraron similitud con otras PLA2 miotóxicas. Btae TX-I pertenece a la clase Asp49 PLA2, es enzimáticamente activo en presencia de un sustrato sintético y muestra un mínimo comportamiento sigmoidal, alcanzando su máxima actividad a pH 8.0 y 35-45°C. La actividad de PLA2 en presencia de Mn2+, Mg2+, Cd2+ y Zn2+ se redujo en presencia o ausencia de Ca2+, lo que sugiere que la disposición del sitio catalítico presenta una estructura exclusiva para Ca2+. Las crotapotinas crotálicas del veneno de serpiente de cascabel han inhibido significativamente (p<0.05) la actividad enzimática de Btae TX-I. En un experimento ex vivo, Btae TX-I causó un bloqueo parcial de la transmisión neuromuscular en preparaciones de biventer cervicis de pollo de manera similar a otras especies de Bothrops. Btae TX-I también inhibía las contracturas en la concentración superior (50 µg) a KCl exógeno (20 mM). El análisis histológico del biventer cervicis incubado con Btae TX-I mostró que solo la dosis más alta de Btae TX-I PLA2 (50 µg) causó casi 27,4 ± 0,3% fibras dañadas. Los resultados evidencian que el efecto principal de PLA2 tipo Asp49 Btae TX-I de Bothriopsis taeniata está en el sitio postsináptico.